Tesis Doctoral
Doctoranda:
Directores:
María Jesús Delgado Igeño
Fecha de presentación:
06-03-2020
Facultad/Escuela y Universidad:
Facultad de Ciencias, Universidad de Granada
Calificación:
Sobresaliente cum laude
Título:
Exploring the role of the haemoglobin from Bradyrhizobium diazoefficiens in nitric oxide detoxification during free-living and endosymbiotic lifestyles
Summary:
En esta Tesis Doctoral, se ha demostrado el papel in vitro de la hemoglobina Bjgb y la flavoproteína Flp de B. diazoefficiens en el metabolismo del NO. Se ha demostrado la capacidad de Flp de reducir a Bjgb. Una vez reducida la Bjgb, el grupo hemo de esta proteína es capaz de unir NO. Con estos resultados se ha demostrado la capacidad de Bjgb de unir NO in vitro, lo cual confirmaría el papel de esta proteína de destoxificar NO in vivo.
En esta Tesis Doctoral, también se ha abordado el estudio de la implicación de la Bjgb de B. diazoefficiens en la interacción simbiótica con plantas de soja y en la homeostasis de NO en los nódulos. Mediante la técnica de la dilución isotópica del 15N y análisis de la actividad y expresión de la enzima nitrogenasa, se ha demostrado que la inoculación de las plantas de soja con la cepa mutante en Bjgb confiere tolerancia al encharcamiento. Este efecto se debe a la reducción de la acumulación de NO en los nódulos que es debida a la inducción de la expresión y actividad de la óxido nítrico reductasa (Nor), la cual es la principal proteína implicada en la eliminación de NO en los nódulos de soja.
Por último, se ha estudiado la implicación en simbiosis del proceso de asimilación de NO3–. Mediante el análisis de la actividad nitrogenasa y contenido en leghemoglobina (Lb) de los nódulos de soja, se ha demostrado que la nitrato reductasa asimilativa (NasC) no tiene un papel relevante en la reducción de NO3– en los bacteroides, siendo la nitrato reductasa periplásmica (NapA) la principal enzima implicada.
Los resultados obtenidos durante esta Tesis Doctoral han contribuido a incrementar el conocimiento sobre la función in vivo e in vitro de la proteína Bjgb de B. diazoefficiens en la destoxificación de NO, tanto en vida libre como en asociación simbiótica con plantas de soja. Además, se ha establecido el posible papel de las proteínas NasC y NirA de B. diazoefficiens en la simbiosis con plantas de soja.
